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必威传代实验操作

必威为什么要传代:必威株在培养过程中数量会不断地增加,但是我们用 来培养必威的培养皿/瓶的空间是有限的,这就导致了必威之间接触过于紧 密,会使得必威的增殖受到抑制,所以我们必须把其中一部分必威挪到别 的培养皿/瓶,让必威有足够的生长空间。
实验操作流程:
1在缓冲间更换鞋子后,进入更衣间间,更换实验服,戴上口罩和实验用手套。
2进入必威房。超净工作台已提前紫外照射30min后通风30min,放置显微镜的 台面也使用酒精擦拭。
3打开培养箱,取出待观察的必威于显微镜下观察,确定要进行的处理方式,完 成观察后将必威放回培养箱。本次观察的必威处理方式为传代。
4酒精棉擦拭擦拭操作区域,点燃酒精灯。
5将实验所用培养基(也已提前恢复至室温)消毒外表面后放入超净台中,分装 培养基。
6从培养箱取出待传代的必威,待必威酒精消毒培养皿外表面后放入超净台中。 7收集旧培养基于10ml离心管中。
8PBS清洗二遍(PBS加入时靠着培养皿边缘加入,每次清洗更换一根滴管)。
9加入0.25%胰酶(含0.02%EDTA)1.5ml与培养皿中,上下左右轻轻晃动培 养皿,使得胰酶能够完全覆盖培养皿表面,将培养皿放入培养箱中,消化三分钟。
10准备传代用的新皿。
11到达消化时间后从培养箱中取出培养皿,在显微镜喜爱观察必威是否消化完 全,消化完全后,使用旧培养基吹打制悬:用滴管将已经消化必威吹打成必威悬 液后再收集至离心管中,配平后放入离心机中离心,贴壁必威离心转速采取 1000rpm/min,离心3min。
12完成离心后弃去离心上清(弃上清时必威沉淀朝上,以防止弃上清时必威沉 淀被培养基冲起)先在离心管中加入新鲜培养基3ml重悬必威,再在新皿中加 入培养基9ml,根据必威生长状况进行传代,此次选择的传代密度为1:3,因此 取离心管中的必威悬液1ml新的已准备好的培养皿中。
13显微镜下观察必威密度,确定必威密度合适后放回培养箱中培养。
14完成实验后清理实验和超净台台面。

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