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组织切片的免疫金标记

 一.   服务介绍                           


       金标记技术(immunogold labelling technique)是以胶体金作为示踪物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。胶体金是由氯金酸在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠和鞣酸等作用下,聚合成特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,故称胶体金。
    
 实验原理:


        利用胶体金在碱性条件下带负电荷的性质,与蛋白质分子的正电荷基团籍静电吸引而形成牢固结合。除抗体外,胶体金还可与其它多种生物大分子,如SPA、PHA、ConA等结合。
   

二.实验试剂以及器材                      

       组织样品


       免疫金标记物
    
       培养箱  显微镜


三.实验方法以及步骤                          
       
       1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。
  
       2.  待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片)。
  
       3.  稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每一载玻片上加40~50 μl 抗体,应能盖住切片)。
  
       4.  用与泵相连的巴斯德吸管,在切片的一端吸去玻片上的PBS,并从另一端加上抗体,盖上加湿盒,室温温育1 h。
 
       5.  以PBS冼玻片3次(5 min/次),从切片一端加入新的PBS缓冲液,由另一端吸去旧的缓冲液。
  
       6.  稀释的第二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每载玻片可加40~50 μl 抗体)。
  
       7.  加免疫金标记第二抗体温育2 h。
  
       8.  显微镜下观察结果或放密闭玻片盒中,室温贮放。
 
       9.  显微镜下观察结果,或置玻片盒中贮于4℃。
       组织切片的免疫金标记       

       (本文来源丁香通)


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