• 全国服务热线021 54012099

    最新研究成果

    必威bet体育

    联系我们

    免疫平台

    免疫血清的制备实验

      一.   服务介绍                          


    一、实验原理


            具有免疫原性的抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。由于抗原分子表面的不同决定簇为不同特异性的B细胞克隆所识别,因此由某一抗原刺激机体后产生的抗体,实际上为针对该抗原分子表面不同决定簇的抗体混合物(即多克隆抗体)。另外,抗体的产生具有回忆应答的规律性,现为初次免疫注射与再次免疫注射后的抗体应答特点截然不同。这是由于记忆性B细胞参与再次应答所致。


      二.实验方法                            


    二、免疫方法 


           根据抗原的性质不同而异。下面以制备家兔抗人IgG免疫血清为例作具体说明。
           1.用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛,以酒精及碘酒消毒皮肤。
           2.第一次免疫
           用2 ml注射器吸取弗氏完全佐剂(FCA)乳化的抗原(人IgG)下称FCA IgG液1 ml,每侧脚掌皮下各注入0.5 ml。
           3.第二次免疫
           间隔10-14 天后,于两侧窝及鼠蹊部肿大的淋巴结内注入FCA-IgG,每个淋巴结注0.1 ml,其余注入淋巴结附近皮下共1 ml。如淋巴结未肿大或肿大不明显时,直接注入两侧窝及鼠蹊部皮下。
           4.间隔7-10 天后,从耳静脉采血0.5~1.0 ml,分离血清,以双相琼脂扩散试验测定免疫血清的抗体效价(即试血)。效价至少应达到1∶16以上时才能放血。
           5.若效价未达到要求,可用不加佐剂的抗原液(人IgG)耳静脉内注射免疫。即于1 周内注射3 次,分别为0.1、0.3、0.5 ml。间隔1 周再试血。如效价达到要求应立即放血。另外,也可在第2 次免疫后,以弗氏不完全佐剂(FIA)乳化的抗原(人IgG)(简称FIA-IgG)再免疫1-2 次。注射部位、剂量和间隔均同第2 次,再试血测抗体效价,如效价达到要求立即放血。
     三、放血 
           1.心脏采用血法
           (1)家兔仰面,四肢缚于动物固定架上(或由助手抓住四肢固定)。
           (2)剪去左胸部兔毛,消毒皮肤。
           (3)用左姆指摸到胸骨剑突处,食指及中指放在右胸处轻轻向左推心脏,并使心脏固定于左胸侧位置。然后,以左拇指触摸心脏搏动最强的部位。
           (4)用50 ml注射器(连接16号针头),倾针45°角度,对准心搏最强处刺入心脏抽血致死。
           (5)将抽取的血液立即注入无菌三角烧瓶中,待凝固后分离血清。
    2.  颈动脉放血法
           (1)家兔仰卧同上固定。头部略放低以暴露颈部。剃毛及消毒皮肤。
           (2)沿颈部中线切开皮肤约10 cm,分离皮下组织,直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌。
           (3)分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织,暴露出颈总动脉后使之游离。
           (4)于动脉下套入两根黑丝线,分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。
           (5)用尖头小剪刀在两根丝线间的动脉璧上剪一小口,插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上,以防放血管滑脱。
           (6)松开血管夹,使血液流入灭菌三角烧瓶中。一般一只家兔可放血80~100 ml。
     四、分离血清
     

           将三角烧瓶的血置37 ℃温箱1 小时,再置4 ℃冰箱内3~4 小时。待血液凝固血块收缩后,用毛细滴管吸取血清。于3000 rpm离心15 分钟,取上清加入防腐剂(0.01 %硫柳汞或0.02 %叠氮钠,最终浓度),分装后置4 ℃冰箱中保存备用。

           免疫血清的制备实验

           (本文来源丁香通)

    上一篇:组织切片的免疫金标记
    下一篇:分子提取方法

    东洪简介技术平台实验方法科研成果必威bet体育必威体育betway网址

    留言 / LEAVE A MESSAGE

    联系我们 / CONTACT US

    上海东洪博元生物技术有限公司
    地址:上海市徐汇区虹漕路421号虹漕园65号楼5楼B座
    联系电话:021 54012099
    联系邮箱:2264183635@qq.com
    深圳市福田区梅林街道梅华路105号福田电子商务产业园1栋422室
    江西省南昌市红谷滩新区金融大街上海湾大厦8楼
    江苏省南京市鼓楼区黄家圩41-1号南京红山创业工厂产业园A2栋3楼
    贵阳市云岩区新添大道中天花园御翠岭B5栋1单元24-3
    福州市台江区金色维也纳B区5栋607
    长沙市开福区天健芙蓉盛世10栋3002

    联系我们: 021 54012099

    关注我们 / FOCUS ON


    扫一扫
    关注东洪博元更多动态

    Copyright 2012-2017 上海东洪博元生物技术有限公司 版权所有
    关键词: 蛋白组学 流式细胞检测 动物造模 基因测序 基因敲除  western blot 透射电镜 免疫组化 原代细胞分离 载体构建 荧光定量PCR  技术支持:汉邦传媒 

    沪ICP备17013725号-2