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    微量免疫电泳实验

      一.   服务介绍                          


           习凝胶内分离蛋白质的电泳技术与利用抗原抗体的特异性反应的免疫扩散技术结合起来, 分析鉴定抗原或者抗体的免疫化学方法。

      

          免疫电泳法(immunoelect rophoresis)是把蛋白质电泳分离技术(琼脂电泳)和免疫学检测技术(双向扩散)结合起来的检测法。此法在微量的基础上具有分辨率高,灵敏度高, 时间短等优点, 是很理想的分离和鉴定蛋白质混合物的方法。用于抗原、抗体定性及纯度的测定。在临床诊断方面也有应用价值。


      二.实验器材以及试剂                    

    实验材料


            人IgG 兔抗人IgG
    试剂、试剂盒


            琼脂 巴比妥钠 牛血清白蛋白
    仪器、耗材


            电泳仪 水平电泳槽 打孔器 微量加样器 牙签 载玻片 恒温水浴 小刀
      三.实验方法以及步骤                    

    1. 琼脂板的铺制
     
            如下图铺好琼脂板,然后按下图打孔划槽,电泳时不要把槽中的琼脂挑出来(槽的两纵向平行边先不划开)。
     





     2.  加样
           

           使琼脂板的上孔里充满抗原溶液,下孔里充满着指示蛋白。
     
    3. 电泳


          同上操作方法,调电流强度为2~4 mA/cm。当指示蛋白质到达滤纸的边缘时就可以停止电泳。一般需要40~60 min。
     

    4. 扩散 


           电泳结束后,从琼脂板中间的槽里用牙签挑出琼脂凝胶,并加入免疫血清。将琼脂板置温盒内(或培养皿中),盖好盖子放置一夜。


           次日可以观察到凝胶内出现的沉淀线。一般情况下每一沉淀线即代表一种抗原成分。根据沉淀的数量、位置可以判断抗原的纯度以及抗原蛋白质的种类。微量免疫电泳常用于分析样品的血清成分。
     
    5. 观察 


            免疫电泳的图谱可以直接观察到抗原抗体沉淀线,也可以用0.1%的氨基黑染色后观察。如果需要保存可以拍照。

           微量免疫电泳实验

           (本文来源丁香园)


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