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      冰冻切片免疫荧光法

        一.   服务介绍                          


             免疫荧光技术是将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出,从而可对抗原进行细胞定位。


        二.实验方法以及步骤                    


             (1)切片冷风吹15 min;


           (2)PBS洗2 min×3;


           (3)滴 加一抗37 ℃ 1 h,PBS洗2 min×3;


           (4)滴加低倍景稀释液,稀释的2抗(FITC)37 ℃ 1 h,PBS洗2 min×3;


           (5)荧光 封片剂封片。
      免疫组化抗原暴露法
       
            蛋白酶K消化法:0.25 mg/ml蛋白酶K滴染37 ℃20 min,PBS 2 min × 3;


            胰酶消化法:0.2% 胰酶滴染37 ℃ 20 min,PBS 2 min×3;


            胃酶消化法:0.4%胃蛋白酶(p H 2)滴染37 ℃ 20 min,PBS 2 min×3次;


            微波加热枸橼酸抗原修复法:用耐高温的塑料染缸装200 ml枸橼 酸抗原修复液,加盖微波大火(750 W)加热2 min沸腾,立刻转为小火(90 W)10 min,自然冷却至室温,蒸馏水冲洗2次,入PBS泡2 min;


            EDTA抗原修复法:用耐高温的塑料染缸装200 ml EDTA抗原修复液,加盖微波大火(750 W)加热2 min沸腾,立刻转为小火(90 W)10 min,自然冷却至室温,蒸馏水冲洗2次,入PBS泡2 min


             (2)PBS洗2 min×3;


             (3)滴 加一抗37 ℃ 1 h,PBS洗2 min×3;


             (4)滴加低倍景稀释液,稀释的2抗(FITC)37 ℃ 1 h,PBS洗2 min×3;


             (5)荧光 封片剂封片。

             冰冻切片免疫荧光法

             (本文来源丁香园)

      冰冻切片免疫荧光法

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