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大肠杆菌感受态细胞的热激转化

原理
质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接
产物转化到感受态细胞中,实现重组克隆的增殖,便于后续分子操作。
实验方法
1.从-80度冰箱取出制备好的感受态细胞;
2.置于冰上慢慢溶解;
3.加入1μL质粒,轻柔混匀;
4.冰浴30min;
5.42℃热激90s;
6.立即放于冰上2min;
7.在超净工作台内进行操作,加入800ulLB培养液;
8.放于37℃摇床培养50min;
9.倒平板,需要根据质粒的抗性加入相应的抗生素;
10.复苏结束后,8000rpm离心3min;
11.去除部分上清,剩余沉淀轻轻悬起,涂布于含有抗生素的LB平板上;
12.37℃培养12h;
13.次日查看结果,发现平板上有单菌落。
注意事项:
1.加样时必须一样一枪头;
2.刚刚化冻的感受态细胞,转化效率最高;
3.感受态细胞应该避免反复化冻;
4.涂布的LB琼脂需提前倒好平板,并且根据相应的载体的抗体加入抗生素;
5.整个操作过程都要轻柔。

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